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影響微反應量熱儀基線位置的因素有哪些?

2021-12-13  來自: 鶴壁市英泰電子電器有限公司 瀏覽次數:65

  等溫滴定量熱法是近年來發展起來的一種研究生物熱力學與生物動力學的重要方法,它通過高靈敏度、高自動化的微反應量熱儀連續、準確地監測和記錄一個變化過程的量熱曲線,原位、在線和無損傷地同時提供熱力學和動力學信息。

  在使用過程中會出現基線位置變化的問題,在這里整理了會影響基線位置的一些主要因素,

  1、在安裝ITC儀器時,避免安裝在陽光直射的位置,以免導致長時間的陽光直射造成溫度沿滴定針傳導至樣品池,造成基線的漂移。

  2、在安裝ITC儀器時,不要安裝空調口直吹的位置,以免導致長時間空調直吹造成溫度沿滴定針傳導至樣品池,造成基線的漂移。

  3、人為操作的不小心,如滴定針不小心被碰彎了(經常發生,當滴定針放在Rest Position的時候,但是很多情況不容易發現),彎曲的滴定針有可能在滴定時持續摩擦樣品池側壁,造成樣品池溫度升高。

  4、安裝的不到位或者固定的螺栓松了。在更換滴定針后滴定針有可能安裝不到位(露出Pipette底部的玻璃針管過長)或者長時間使用后固定滴定針的螺栓發生松動導致滴定針下沉,可能導致滴定時由于滴定針過長摩擦樣品池底部,造成樣品池溫度升高。

  5、攪拌速率的影響。不同的攪拌速率會帶來不同的熱量釋放(攪拌速率越高,溫度越高,基線越低,反之亦然。)。一般在ITC實驗中,我們都設置的是恒定的攪拌速率,一般不會由于攪拌速率改變造成基線的變化。但在某些Pipette故障或者樣品粘度較高造成攪拌器轉動不均時,可能會導致樣品池熱量的變化。

  6、樣品池中有氣泡。這個現象可能是常見的影響初始基線位置的原因了。樣品溫度、加樣技巧等都可能對基線有影響。當樣品池中存在由于加樣或者樣品因溫度差脫氣造成的小氣泡時(由于水的比熱容要比空氣大,氣泡占據了水分子的位置導致樣品池中整體比熱容下降),在給樣品池施加與參考池相同的功率時,樣品池的溫度會比參考池稍高,進而使傳感器“誤認為”樣品池更熱,從而減少給樣品池的功率,造成基線下降。在出色的操作技巧下,實際的初始基線一般和設定的Reference Power相差0.1ucal/s左右,當然,一般情況下,±1 ucal/s的初始基線位置偏離一般是可以接受的。有一個需要注意的問題是,當操作含有Detergent(如Triton X100, NP40等)的膜蛋白樣品時,建議小心的一次加樣完成,不建議通過吸打的方式排出氣泡,這樣可能會使問題更加嚴重

  7、參考池中有氣泡。這個現象與上面描述的現象正好相反。

  8、基線呈階梯狀下降。 當滴定針中有空氣或者沒有全充滿樣品時,在滴定過程中,隨著樣品的注入,樣品池中由于空氣的不斷注入導致樣品池的比熱容一直在降低,導致基線呈階梯狀下降;另一種可能的原因連接滴定針的Fill Port Adaptor (FPA) 磨損造成的,這種情況需要更換新的FPA;在使用ITC研究酶促動力學的過程中,也會出現類似的現象,可以考慮反應物之間是否存在可能的催化過程。

  9、樣品池中未充滿。 當樣品池沒有全充滿時,隨著滴定針中反應物的逐漸注入,樣品池逐漸充滿,導致樣品池中的比熱容逐漸提高,導致基線呈階梯狀上升。因此,請加滿280 ul樣品并排出氣泡。

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